1、研究腫瘤細胞增殖

細胞準備：GeneA敲減慢(màn)病毒感染細胞擴增至需要的細胞量。分(fēn)爲：空白(bái)對照組、陰性對照組、實驗組。

取Balb/c裸鼠，雄性，6周齡，每組10隻，适應一(yī)周後進行腫瘤細胞注射。XXX細胞消化離(lí)心後制成單細胞懸液，計數後取适量的細胞用PBS懸浮，在Balb/c裸鼠側腹部皮下(xià)接種。每隻接種2×10⁶個細胞，注射體(tǐ)積爲100 μL。此後，每隔5天測量注射部位腫瘤的體(tǐ)積。30天後裸鼠小(xiǎo)鼠腹腔注射80 mg/kg戊巴比妥鈉，小(xiǎo)鼠麻醉後置藍(lán)色背景布上拍照（側卧位，接種部位朝上），小(xiǎo)鼠頸椎脫臼處死，取出腫瘤稱重，将腫瘤置藍(lán)色背景布上拍照，腫瘤一(yī)分(fēn)爲二，一(yī)份4%多聚甲醛固定，待後續病理分(fēn)析，一(yī)份-80℃凍存。

2、研究腫瘤細胞轉移

腫瘤轉移的模型包括兩大(dà)類：體(tǐ)外(wài)(浸潤模型)和體(tǐ)内(轉移模型)。體(tǐ)外(wài)(浸潤模型)：了解腫瘤細胞對周圍相連組織的侵潤性。體(tǐ)内模型主要研究腫瘤細胞的轉移性即腫瘤細胞在遠端組織形成病竈的能力。

2.1. 體(tǐ)外(wài)(浸潤模型)

例：浸潤型腦膠質瘤動物(wù)模型的建立

方法：取若幹隻Balb/c免疫缺陷裸鼠，将分(fēn)離(lí)和鑒定并轉染攜帶綠色熒光蛋白(bái)的腦膠質瘤幹細胞立體(tǐ)定向法行小(xiǎo)鼠顱内接種，每組10隻。小(xiǎo)鼠麻醉後頭部正中(zhōng)切口，剝離(lí)骨膜後鑽孔(坐标是冠狀縫後0.5 cm，矢狀縫右側2.5 cm) 。取2 μL膠質瘤幹細胞以1×10⁴ cells /隻小(xiǎo)鼠的劑量，經微量注射器緩慢(màn)注射入鼠腦紋狀體(tǐ)内(深度是2.5 ～3 mm) 。在确定的時間點處死一(yī)部分(fēn)動物(wù)進行熒光( 立體(tǐ)熒光顯微鏡下(xià)) 病理證實和比較，同時檢查腦膠質瘤幹細胞的體(tǐ)内生(shēng)長特征以及幹細胞标志(zhì)物(wù)等。

2.2. 體(tǐ)内(轉移模型)

例：肩胛部皮下(xià)接種的方法建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型，目的：觀察壯骨鎮痛膠囊對裸鼠乳腺癌移植瘤模型骨轉移相關指标整聯蛋白(bái)αvβ3（ITG-αvβ3）及骨唾液酸蛋白(bái)（BSP）表達的影響。

方法：取處于對數生(shēng)長期的乳腺癌細胞MDA-MB-231，用0.25%胰蛋白(bái)酶消化制成單細胞懸液，收集細胞，細胞計數闆法計數，調節細胞濃度爲2×10⁷個/mL，按0.2 mL/隻接種于裸鼠右前肢肩胛上區，接種部位可以見一(yī)皮丘，質軟，2 天後，皮丘基本吸收，10 天後接種部位可觸及米粒大(dà)結節，質硬，即乳腺癌移植瘤組織。檢測壯骨鎮痛膠囊對移植瘤組織中(zhōng)IGT-αvβ3和BSP表達的影響。

例：原位移植建立人腎透明細胞腺癌裸鼠轉移模型，觀察腫瘤病理學特征。

方法：收集體(tǐ)外(wài)培養的對數生(shēng)長期786-0細胞（人腎透明細胞腺癌細胞），進行裸鼠皮下(xià)注射，待皮下(xià)移植瘤長至直徑爲1.5cm左右時取出，以相同方法進行鼠間傳代（每代2隻），3～4代後取出移植瘤，剪成1mm³大(dà)小(xiǎo)進行腎包膜下(xià)原位接種，獲人腫瘤裸鼠轉移模型，即外(wài)科原位移植（Surgical Orthotopic Implantation，SOI）模型，裸鼠垂死時脫頸處死，取出肺髒轉移竈體(tǐ)外(wài)培養，胰酶消化傳代4～5次後即獲得較純的腫瘤細胞，命名爲786-0-LM1。同時采用786-0細胞懸液進行腎包膜下(xià)原位注射，建立細胞原位注射模型。

3、研究腫瘤細胞耐藥

3.1. 耐藥細胞株的建立

本實驗以紫杉醇爲誘導藥，以人食管鱗癌細胞系 EC109 爲誘導對象，采用高劑量間歇誘導結合時間遞增的方法建立耐藥細胞株。終濃度爲 0.625 μg/ml 的紫杉醇（此濃度是紫杉醇對 EC109 細胞 IC50 的 12.5 倍）作用于對數生(shēng)長期的EC109 兩個小(xiǎo)時，之後棄含藥培養基，用 4℃PBS 洗三次，0.25%胰蛋白(bái)酶消化處理，800r/min 離(lí)心 4min 收集細胞，加培養基重懸，重新接種于培養瓶繼續培養；24 小(xiǎo)時後可見大(dà)量細胞死亡，不斷去(qù)除凋亡細胞，擴增活細胞，至生(shēng)長狀态良好，達到 70%~80%飽和時，傳代培養 3 代；重複上述操作兩次，即 EC109細胞在此階段共被藥物(wù)作用 3 次，得到細胞 EC109/Taxol。MTT 實驗測定親本細胞與耐藥細胞對多種細胞毒類化合物(wù)的敏感性。

3.2. 裸鼠移植瘤耐藥模型的建立

無菌條件下(xià)收集親本株 EC109 和耐藥株EC109/Taxol 細胞，用無菌生(shēng)理鹽水稀釋至 5×10⁷個/ml，采用皮下(xià)移植方法，分(fēn)别接種 EC109 和 EC109/Taxol 細胞于裸鼠右側腋窩皮下(xià)，每隻接種 1×10⁷個細胞。待其成瘤後（直徑達 1cm)即認爲此瘤塊爲腫瘤，記錄兩細胞成瘤時間及成瘤率。