外(wài)泌體(tǐ)中(zhōng)含有豐富的蛋白(bái)質，這些蛋白(bái)質可以提供有關外(wài)泌體(tǐ)的信息，如來源、功能和表征等。常見的外(wài)泌體(tǐ)蛋白(bái)檢測方法包括蛋白(bái)免疫印迹（Western blot）、酶聯免疫吸附檢測（ELISA）、質譜檢測（LC-MS/MS）、納米流式檢測（NanoFCM）等，根據國際細胞外(wài)囊泡協會發表的《MISEV 2018》指南(nán)建議，外(wài)泌體(tǐ)蛋白(bái)檢測最好包含跨膜蛋白(bái)、胞質蛋白(bái)、陰性蛋白(bái)（三陽一(yī)陰）的組合，實際檢測可根據樣品量、物(wù)種抗體(tǐ)、儀器限制等實際情況進行最優選擇。

1.  蛋白(bái)免疫印迹（Western blot）

       Western blot是通過抗原抗體(tǐ)特異性結合的原理，對外(wài)泌體(tǐ)标志(zhì)蛋白(bái)進行檢測，從蛋白(bái)質層面對外(wài)泌體(tǐ)進行鑒定。本公司統計了文獻内最常用的抗體(tǐ)指标，默認提供5個陽性指标（CD9、CD63、CD81、TSG101、Syntenin）和1個陰性指标（Calnexin）抗體(tǐ)可供客戶選擇。由于外(wài)泌體(tǐ)存在免疫分(fēn)型，可能導緻檢測某些陽性指标時實際蛋白(bái)表達量低于Western blot的靈敏度檢測下(xià)限而無法呈現陽性條帶，一(yī)方面公司會默認設置增加陽性對照來驗證實驗操作和抗體(tǐ)結合無誤，另一(yī)方面建議客戶考慮調整使用納米流式檢測儀（Flow NanoAnalyzer）、全自動蛋白(bái)定量系統（WES）等靈敏度更高的方法來提高檢出率。

2.  納米流式檢測（NanoFCM）

       外(wài)泌體(tǐ)表面保留有較完整的抗原，可使用熒光直标的特異性單克隆抗體(tǐ)孵育外(wài)泌體(tǐ)，再用納米流式檢測儀進行檢測，根據所測定的陽性顆粒占比即可知(zhī)其表面蛋白(bái)表達的情況，從而實現外(wài)泌體(tǐ)表面蛋白(bái)檢測。外(wài)泌體(tǐ)常見的特異性标記蛋白(bái)爲CD9、CD63和CD81，使用熒光直标的抗體(tǐ)與外(wài)泌體(tǐ)共孵育後進行超速離(lí)心清洗多餘的遊離(lí)抗體(tǐ)即可進行納米流式檢測儀的測定。（特别提醒：默認提供3個抗體(tǐ)指标可檢測人源和鼠源蛋白(bái)，其他物(wù)種或其他表面标志(zhì)蛋白(bái)需客戶提供直标抗體(tǐ)）

3.  全自動蛋白(bái)定量系統（WES）

       Wes系統采用革新的Simple Western技術，颠覆30多年傳統的Western Blot方法，實現在同一(yī)根樣品管中(zhōng)完成樣品分(fēn)離(lí)、捕獲、固定，免疫檢測和定量分(fēn)析其優點在于，不用制膠和跑膠，不用轉膜，減少實驗步驟，避免樣品損失；自動進行一(yī)抗二抗孵育和化學發光檢測，自動進行結果分(fēn)析，有效提高檢測結果的精确性和重複性；單個樣品上樣體(tǐ)積3-5ul，節約珍貴樣品和抗體(tǐ)；一(yī)次運行時間3個小(xiǎo)時，快速高效，檢測靈敏度高，低至pg級；實驗完成後自動給出詳盡的分(fēn)析數據，包括目的蛋白(bái)大(dà)小(xiǎo)、信噪比、峰面積和含量；可對結果自動進行精确的定量分(fēn)析。

檢測項目